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東莞PCR實驗室
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東莞市銘科實驗室設備有限公司
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PCR實驗室又叫基因擴增實驗室。PCR是聚合酶鏈式反應(Polymerase Chain Reaction)的簡稱。是一種分子生物學技術，用于放大特定的DNA片段，可看作生物體外的特殊DNA復制。用于基因檢測，具有高度敏感性、特異性、快速、簡單等特點，能將傳統(tǒng)方法難以檢測的極少數(shù)病毒DNA片段擴增百萬倍以上，從而大大提高疾病的診斷水平。它不僅可用于基因分離、克隆和核酸序列分析等基礎研究，還可用于疾病的診斷或任何有DNA,RNA的地方．又稱無細胞分子克隆或特異性DNA序列體外引物定向酶促擴增技術。
PCR實驗室平面規(guī)劃圖：
PCR實驗室技術要求：
標準的PCR實驗室設計規(guī)劃：
1 、PCR實驗室平面布局
PCR擴增檢驗實驗室原則上分為三個單獨的工作區(qū)域：試劑貯存和準備區(qū)、標本制備區(qū)、擴增和擴增產(chǎn)物分析區(qū)。為避免交叉污染，進入各個工作區(qū)域必須嚴格遵循單一方向進行，即只能從試劑貯存和準備區(qū)→標本制備區(qū)→擴增和擴增產(chǎn)物分析區(qū)。
各實驗區(qū)之間的試劑及樣品傳遞應通過傳遞窗進行。
2、實驗室空調(diào)通風系統(tǒng)設計及壓力控制
PCR實驗室并沒有嚴格的凈化等級要求，但是為避免各個實驗區(qū)域間交叉污染的可能性，宜采用全送全排的氣流組織形式。同時，要嚴格控制送、排風的比例以保證各實驗區(qū)的壓力要求。
2.1試劑貯存和準備區(qū)
該實驗區(qū)主要進行的操作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應混合液的制備。試劑和用于樣品制作的材料應直接運送至該區(qū)，不得經(jīng)過其他區(qū)域。試劑原材料必須貯存在本區(qū)內(nèi)，并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。
對與氣流壓力的控制，本區(qū)應對外界保持微正壓。
2.2標本制備區(qū)
該區(qū)域主要進行的操作為樣本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應管和測定DNA的合成。
本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為正壓，以避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染。另外，由于在加樣操作中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染，所以應避免在本區(qū)內(nèi)不必要的走動。
2.3擴增和擴增產(chǎn)物分析區(qū)
該區(qū)域主要進行的操作為DNA擴增和擴增片段的測定。此外，已制備的DNA模板 (來自樣本制備區(qū))的加入和主反應混合液(來自試劑貯存和制備區(qū))制備成反應混合液等也可在本區(qū)內(nèi)進行。
本區(qū)的壓力梯度要求為：相對于鄰近區(qū)域為負壓，以避免氣溶膠從本區(qū)漏出。為避免氣溶膠所致的污染，應盡量減少在本區(qū)內(nèi)的不必要的走動。個別操作如加樣等應在超凈臺內(nèi)進行。
3、污染的預防與控制
PCR實驗室設計的核心問題是如何避免污染。在實際工作中，常見的有以下幾種污染類型：擴增產(chǎn)物的污染；天然基因組DNA的污染；試劑的污染以及標本間的污染。由于一旦發(fā)生污染，實驗就必須停止，直到找到污染源為止，而且實驗結果必須作廢，需重新進行實驗。所以發(fā)生污染后再圍繞實驗室來尋找污染源不但耗時而且繁瑣，浪費人力物力。因此要避免污染，首先應是預防，而不是排除。
3.1工作區(qū)域的嚴格劃分
（1）各個實驗區(qū)域設置合理；
（2）各個實驗區(qū)域要有明顯的標記（如醒目的門牌或不同的地面顏色等），以避免各個不同實驗區(qū)域設備物品、試劑等發(fā)生混淆。
3.2合理的系統(tǒng)設置
（1）合理的空調(diào)通風系統(tǒng)設置，盡量采用全送全排的空調(diào)系統(tǒng)；
（2）嚴格的氣流壓力控制，保證不同的實驗區(qū)內(nèi)不同的壓力要求。
3.3 規(guī)范的操作
（1）擴增檢驗實驗室的技術人員必須進行上崗培訓，經(jīng)培訓合格后才能從事臨床基因擴增檢驗的工作；
（2）在實驗操作過程中，操作者必須戴手套，并經(jīng)常更換。此外，操作中使用一次性帽子也是一個有效地防止污染的措施；
（3）清潔工作及時、正確。實驗工作結束后，必須立即對本區(qū)進行清潔。除常規(guī)的消毒液體對表面進行擦拭消毒或紫外線燈的照射消毒外，對一些實驗設備還應進行高壓消毒處理。
3.4嚴格的管理
（1）嚴格控制進出實驗室的人員。與實驗無關的人員不得隨意進出實驗室，有條件的情況下要設置獨立的通道和進出整個實驗區(qū)的門；
（2）盡量減少在實驗區(qū)內(nèi)不必要的走動以減少交叉污染的可能性。
（3）擴增產(chǎn)物分析區(qū)是最主要的擴增產(chǎn)物污染來源，廢液不能在實驗室中傾倒，必須經(jīng)消毒液浸泡消毒后在遠離實驗室的地方棄掉，用過的吸頭等一次性材料也應經(jīng)消毒液浸泡消毒后統(tǒng)一處理，如焚燒等；
（4）擴增產(chǎn)物分析區(qū)可能會用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì)，應特別注意實驗人員的安全防護。
3.5完備的實驗室配套設施
完備的實驗室配套設施是保證實驗工作的必要條件，應根據(jù)各個實驗室實驗內(nèi)容的不同配備相應的設備和儀器，如超凈工作臺、離心機、加樣器等。
疾控中心PCR 實驗室基本要求:
1、 PCR 實驗室依據(jù)所使用的方法可分為試劑準備、標本制備、擴增、產(chǎn)物分析等三或四個區(qū)域。只是使用實時熒光PCR儀、HIV病毒載量測定儀的PCR實驗室，有上述前面三個區(qū)域即可。各區(qū)域應完全獨立分隔，不應有任何的空氣直通。
2 、 產(chǎn)物分析區(qū)或三個區(qū)域的最后一個區(qū)域（即擴增及產(chǎn)物分析區(qū)），空氣流向應由室外向室內(nèi)，可通過在室內(nèi)設置通風櫥、排風扇或其他排風系統(tǒng)達到空氣流由室外向室內(nèi)流動的要求。
3 、PCR實驗室各區(qū)域儀器設備配備通常如下：
3.1、 試劑準備區(qū)
儀器設備主要應有加樣器、冰箱、天平、低速離心機、混勻器、可移動紫外燈等�？墒褂贸瑑艄ぷ髋_作為試劑配制操作臺面。
3.2、標本制備區(qū)
儀器設備主要應有生物安全柜（最好為B2, 可避免提取核酸在柜內(nèi)反復循環(huán)，造成標本間交叉“污染”，出現(xiàn)假陽性結果。此外還應配備加樣器、臺式高速離心機（冷凍及常溫）、臺式低速離心機、恒溫設備（水浴和/或干浴儀）、冰箱、混勻器和可移動紫外燈等。
3.3、 擴增區(qū)
主要儀器就是核酸擴增熱循環(huán)儀（PCR儀，實時熒光或普通的）。熱循環(huán)儀的電源應專用，并配備一個穩(wěn)壓電源或UPS，以防止由于電壓的波動對擴增測定的影響。此外，根據(jù)工作需要，還可配備加樣器、超凈臺等。
3.4 產(chǎn)物分析區(qū)：
本區(qū)所使用的儀器設備可能有加樣器、電泳儀（槽）、電轉(zhuǎn)印儀、雜交爐或雜交箱、水浴箱、DNA測序儀、酶標儀和洗板機等。
